新一代核酸染料—GelRed 和GelGreen

GelRed 和GelGreen是为代替高毒性的EB设计产生的新一代荧光核酸染料。由Biotium公司开发。相对于EB和其他的EB替代物，GelRed 和GelGreen有更多的优势：低毒性，高灵敏性，高稳定性。

EB由于其价格低和足够高的灵敏性，使其成为近几十年来最常用的核酸凝胶染料。但是EB是一种强诱变化学试剂。由于其存在的安全危害以及处理污染物所花费的大量金钱，使其使用变得并不廉价，也不再方便。基于这种原因，替代品开始出现，比如SYBR系列染料近年来开始应用于市场中。但这些产品虽然降低了危害性，却损失了产品的灵敏性和稳定性。比如SYBR Safe的灵敏性很低，SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA，从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力，使DNA或其他物质发生突变（Ohta，et al.Mut Res 492,91(2001)）。

SYBR Safe则不能做到。此外，环境安全实验也显示GelRed 和GelGreen对水栖动物没有影响，因此GelRed 和GelGreen没有环境破坏性，使用后能做一般的处置。

GelRed 和GelGreen特点：

更安全：艾姆斯氏实验以及其他实验证实无诱变性无细胞毒性；

更方便处理：通过了环境安全实验，可以直接丢弃无需特殊处理。

超灵敏：比EB和SYBR Safe更灵敏。

更稳定：室温下，溶液中可稳定存在。

使用更方便：可预染也可后染。

与常用的仪器兼容：GelRed 可用EB常用仪器观察；GelGreen可用SYBR染料仪器进行观察。

可用于下游实验：普通的胶回收后，可用于下游实验。

                           EB                                                       GelRed

                    SYBR Safe                                    GelGreen

图1. GelRed 和GelGreen比EB和SYBR Safe更灵敏。左图：比较了GelRed 和EB 的1%预制胶，TBE缓冲液跑胶。右图：比较了GelGreen和SYBR Safe 1%琼脂糖凝胶的后染状况，同样在TBE缓冲液中完成。选用了Invitrogen的1 Kb的DNA Ladder作2倍稀释，分别加入四个泳道中，从左向右依次为200ng，100ng，50ng和25ng。

SYBR Safe                      GelRed                         GelGreen

图2. GelRed 和GelGreen更安全，因为它们不能穿过活细胞的细胞膜结合到DNA上。用1×SYBR Safe，GelRed 和GelGreen分别在37℃孵育Hela细胞。随后用FITC处理过的SYBR Safe和GelGreenGelRed 及Cy3处理GelRed孵育细胞。SYBR Safe很快进入细胞使核染色。GelRed 和GelGreen不能穿过细胞膜，不能观察到被染上色的细胞，仅在少量死亡的细胞中看到零星的荧光。